斐林试剂中乙液为0.05g/ml的CuSO4溶液，双缩脲试剂中CuSO4溶液为0.01g/ml，后者的浓度小，用量也只有一滴。
蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物，因此蛋白质与斐林试剂会反应，但是斐林试剂浓度过高的CuSO4在碱性溶液中会生成大量的蓝色的Cu(OH)2沉淀，遮蔽蛋白质反应所产生的紫色，所以实验现象看不出来。因此斐林试剂和双缩脲试剂不能混用。
